vmireavizВестник медицинского института «РЕАВИЗ». Реабилитация, Врач и ЗдоровьеBulletin of the Medical Institute "REAVIZ" (REHABILITATION, DOCTOR AND HEALTH)2226-762X2782-1579РЕАВИЗ10.20340/vmi-rvz.2025.3.MORPH.4vmireaviz-1304Research ArticleМорфология, патологияMorphology, pathologyВыбор оптимальной среды для разведения пулированных концентратов тромбоцитов, размороженных после криохраненияChoosing the optimal dilution medium for pooled platelet concentrates, thawed after cryopreservationhttps://orcid.org/0000-0002-2184-2982МакаровМ. С.MakarovM. S.

Макаров Максим Сергеевич - Д-р биол. наук, старший научный сотрудник отделения биотехнологий и трансфузиологии Вклад автора: разработка концепции и дизайна, анализ данных литературы, сбор и обработка материала, написание и редактирование текста.

Большая Сухаревская пл., д. 3, г. Москва, 129090

Maksim S. Makarov - Dr. Sci. (Biol.), Senior Researcher, Department of Biotechnology and Transfusiology Author's contribution: concept and design development, literature analysis, collection and processing of material, writing and editing of text.

3, Bolshaya Sukharevskaya sq., Moscow, 129090

MakarovMS@sklif.mos.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1927-2404СторожеваМ. В.StorozhevaM. V.

Сторожева Майя Викторовна - Научный сотрудник отделения биотехнологий и трансфузиологии Вклад автора: разработка концепции и дизайна, сбор и обработка материала.

Большая Сухаревская пл., д. 3, г. Москва, 129090

Mayya V. Storozheva - Researcher, Department of Biotechnology and Transfusiology Author's contribution: concept and design development, collection and processing of material.

3, Bolshaya Sukharevskaya sq., Moscow, 129090

mayya.storozheva@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8897-7523БоровковаН. В.BorovkovaN. V.

Боровкова Наталья Валерьевна - Д-р мед. наук, зав. научным отделением биотехнологий и трансфузиологии; доцент кафедры клинической лабораторной диагностики Вклад автора: разработка концепции и дизайна, написание и редактирование текста.

Большая Сухаревская пл., д. 3, г. Москва, 129090;ул. Баррикадная, д. 2/1, стр. 1, г. Москва, 125993

Natal'ya V. Borovkova - Dr. Sci. (Med.), Head of the Department of Biotechnology and Transfusiology; Associate Professor of the Department of Clinical Laboratory Diagnostics Author's contribution: concept and design development, writing and editing of the text.

3, Bolshaya Sukharevskaya sq., Moscow, 129090;2/1, Barrikadnaya st., bldg. 1, Moscow, 125993

BorovkovaNV@sklif.mos.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6999-8145БулановА. Ю.BulanovA. Yu.

Буланов Андрей Юльевич - Д-р мед. наук, ведущий научный сотрудник отделения биотехнологий и трансфузиологии Вклад автора: разработка концепции и дизайна.

Большая Сухаревская пл., д. 3, г. Москва, 129090

Andrey Yu. Bulanov - Dr. Sci. (Med.), Leading Researcher of the Department of Biotechnology and Transfusiology Author's contribution: concept and design development.

3, Bolshaya Sukharevskaya sq., Moscow, 129090

BulanovAY@sklif.mos.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2523-6939ПономаревИ. Н.PonomarevI. N.

Пономарев Иван Николаевич - Канд. мед. наук, старший научный сотрудник отделения биотехнологий и трансфузиологии Вклад автора: сбор и обработка материала.

Большая Сухаревская пл., д. 3, г. Москва, 129090

Ivan N. Ponomarev - Cand. Sci. (Med.), Senior Researcher, Department of Biotechnology and Transfusiology Author's contribution: collection and processing of material.

3, Bolshaya Sukharevskaya sq., Moscow, 129090

rzam@yandex.ruНаучно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. СклифосовскогоРоссияN.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency MedicineRussian FederationНаучно-исследовательский институт скорой помощи им. Н.В. Склифосовского; Российская медицинская академия непрерывного профессионального образованияРоссияN.V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency Medicine; Russian Medical Academy of Continuous Professional EducationRussian Federation202501082025153165171Copyright © Макаров М.С., Сторожева М.В., Боровкова Н.В., Буланов А.Ю., Пономарев И.Н., 20252025Макаров М.С., Сторожева М.В., Боровкова Н.В., Буланов А.Ю., Пономарев И.Н.Makarov M.S., Storozheva M.V., Borovkova N.V., Bulanov A.Y., Ponomarev I.N.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://vestnik.reaviz.ru/jour/article/view/1304

Актуальность. В настоящее время методика криоконсервирования пулированных концентратов тромбоцитов (ПулКТ) требует оптимизации. Актуальной задачей является подбор адекватного препарата для разведения размороженных доз с целью снижения токсического действия криопротекторов. Цель работы: оценить влияние плазмозамещающих растворов на морфофункциональные свойства пулированных концентратов тромбоцитов после их криоконсервирования, криохранения и разморозки. Материалы и методы. В работе исследовали морфофункциональные свойства тромбоцитов ПулКТ, криоконсервированных в присутствии 5–6% диметилсульфоксида и 0,5% декстрана и разведённых после разморозки разными средами. Для ресуспендирования тромбоцитов использовали аутологичную бесклеточную среду, выделенную из ПулКТ до заморозки тромбоцитов, аллогенную свежезамороженную плазму, плазмозамещающий раствор InterSol, препарат-заменитель плазмы – реополиглюкин. Для оценки качества тромбоцитов использовали метод тромбоэластографии и метод оценки морфофункционального статуса тромбоцитов с помощью витального окрашивания флуорохромными красителями. Результаты. Исходные ПулКТ заметно различались по жизнеспособности и структурно-функциональным особенностям тромбоцитов в их составе. При разведении размороженных ПулКТ аутологичной средой или свежезамороженной плазмой в соотношении 1:9 сохранность общего числа биологически полноценных тромбоцитов составляла в среднем 52–53%, раствором InterSol – 37%, реополиглюкином – 8%. Раствор InterSol вызывал спонтанную активацию тромбоцитов, реополиглюкин – спонтанную активацию, сопряжённую с массовым разрушением тромбоцитов. Выявлена корреляционная взаимосвязь между сохранностью биологически полноценных тромбоцитов после разморозки ПулКТ и морфофункциональными параметрами в исходных ПулКТ. При разведении размороженных ПулКТ аутологичной средой или свежезамороженной плазмой в соотношении 1:9 морфофункциональный статус тромбоцитов не менялся в течение 2–3 часов, при разведении в соотношении 1:4 – в течение 30 мин. Выводы. В ПулКТ перед криоконсервированием наблюдается снижение ряда морфофункциональных характеристик тромбоцитов на фоне их повышенной реактивности. Ресуспендирование размороженных ПулКТ в чистом растворе InterSol или полиглюкине приводит к быстрой потере качества тромбоцитов и является неэффективным. Для разведения размороженных пулированных концентратов тромбоцитов рекомендуется использовать аутологичную среду с плазмой или аллогенную свежезамороженную плазму.

Background. The current methods of cryopreservation, working with pooled platelet concentrates (PPC), require optimization. An urgent task is to select adequate dilution of thawed doses in order to reduce the toxic effect of cryoprotector. The aim of work. To evaluate the effect of plasma-substituting solutions on the morphofunctional properties of pooled platelet concentrates after their cryopreservation, cryopreservation and defrosting. Materials and methods. We studied morphofunctional properties of platelets, cryopreserved in the presence of 5–6% dimethyl sulfoxide and 0.5% dextran and diluted after defrosting with different media. Autologous cell-free medium, isolated from PPC before platelet freezing, allogeneic fresh-frozen plasma (FFP), plasma-substituting InterSol solution, plasma substitute rheopolyglucine were used for platelet resuspension. To assess the quality of platelets we used the method of thromboelastography and the method of morphofunctional platelet analysis, including vital staining with fluorochrome dyes. Results. The initial PPC-samples significantly differed in the viability, structural and functional features of platelets. When thawed PPC-samples were diluted with in ratio 1:9, in experiments with autologous medium or FFP the safety of the total number of biologically complete platelets averaged 52–53%, with InterSol solution – 37%, rheopolyglucine – 8%. InterSol solution caused spontaneous platelet activation, while rheopolyglucine caused spontaneous activation associated with massive platelet destruction. Correlation was revealed between the preservation of biologically complete platelets after defrosting of the PPC and morphofunctional parameters in the initial PPC. When thawed PPC-samples were diluted with autologous medium or FFP in ratio 1:9, the morphofunctional status of platelets did not change for 2–3 hours, in ratio 1:4 – for 30 minutes. Conclusions. Before cryopreservation PPC presented decrease of morphofunctional characteristics of platelets, followed with their increased reactivity. Resuspension of thawed PPC in pure InterSol solution or polyglucine leads to rapid loss of platelet quality and is ineffective. For the dilution of thawed PPC it is recommended to use autologous plasma medium or allogeneic fresh frozen plasma.

концентрат тромбоцитов [D017713]криоконсервирование [D015925]размораживание [D058108]среда для разведения [D003470]пулированные тромбоциты [D017713]функциональная активность [D019245]агрегация тромбоцитов [D010974]адгезия тромбоцитов [D010973]физиологический раствор [D012965]platelet concentrate [D017713]cryopreservation [D015925]thawing [D058108]dilution medium [D003470]pooled platelets [D017713]functional activity [D019245]platelet aggregation [D010974]platelet adhesion [D010973]physiological saline [D012965].ReferencesХамитов Р.Г., ГаврилейА.В., Дрожжина И.Е., Костикова О.Н., Кочеткова М.А., Медянцева Л.Г., и др. Трудности внедрения пулированных тромбоцитов. Тромбоз, гемостаз и реология. 2022;(4):22–29. https://doi.org/10.25555/THR.2022.4.1037Khamitov R.G., Gavriley A.V., Drozhzhina I.E., Kostikova O.N., Kochetkova M.A., Medyantseva L.G., Rassokhina O.I., Taskaeva E.I., Shestakov E.A., Zhiburt E.B. Difficulties in the pooled platelets implementation. Tromboz, gemostaz i reologiya. 2022; (4):22–29. (In Russ.). https://doi.org/10.25555/THR.2022.4.1037Высочин И.В., Кобзева Е.Н., Макаров М.С., Хватов В.Б., Костин А.И., Серых А.В., и др. Клинико-экономическое обоснование оценки индивидуальной совместимости криоконсервированных тромбоцитов и тромбоцитных концентратов перед трансфузией реципиентам. Трансфузиология. 2016;17(3):57-74.Vysochin I.V., Kobzeva E.N., Makarov M.S., Khvatov V.B., Kostin A.I., Serykh A.V., Aristakesyan A.A., Roganova E.A. Clinical and labor value points individual compatibility studying of cryopreserved platelets and platelet concentrates before transfusion to recipients. Transfusiologija. 2016;17 (3):57-74 (In Russ.).Valeri CR, Macgregor H, Ragno G. Correlation between in vitro aggregation and thromboxane A2 production in fresh, liquid-preserved, and cryopreserved human platelets: effect of agonists, pH, and plasma and saline resuspension. Transfusion. 2005;45(4):596-603. PMID:. 15819682. https://doi.org/10.1111/j.0041-1132.2005.04291.xValeri CR, Macgregor H, Ragno G. Correlation between in vitro aggregation and thromboxane A2 production in fresh, liquid-preserved, and cryopreserved human platelets: effect of agonists, pH, and plasma and saline resuspension. Transfusion. 2005;45(4):596-603. PMID:. 15819682. https://doi.org/ 10.1111/j.0041-1132.2005.04291.xБуланов А.Ю., Макаров М.С., Боровкова Н.В., Сторожева М.В., Пономарев И.Н., Евсеев А.К., и др. Сравнение параметров качества тромбоцитов в аферезных и пулированных концентратах. Медицинский алфавит. 2024;(20):59–64. https://doi.org/10.33667/2078‑5631‑2024‑20‑59‑64Bulanov A. Yu., Makarov M. S., Borovkova N. V., Storozheva M. V., Ponomarev I. N., Evseev A. K., Goroncharovskaya I. V., Bitkova E. E., Kostin A. I. Comparing quality parameters of apheresis and pooled platelet concentrates. Medical alphabet. 2024;(20):59–64. (In Russ.). https://doi.org/10.33667/2078‑5631‑2024‑20‑59‑64Макаров М.С. Неканонические способы активации тромбоцитов человека. Медицинский алфавит. 2015;3(11):30-35.Makarov M.S. Non-canonic ways to human platelet activation. Medical alphabet. 2015;3(11):30-35. (In Russ.).Tynngård N, Bell A, Gryfelt G, Cvetkovic S, Wikman A, Uhlin M, et al. Cryopreservation of buffy coat derived platelets: Paired in vitro characterization using uncontrolled versus controlled freezing rate protocols. Transfusion. 2021;61(2):546-556. PMID: 33345368 https://doi.org/10.1111/trf.16227Tynngård N, Bell A, Gryfelt G, Cvetkovic S, Wikman A, Uhlin M, et al. Cryopreservation of buffy coat derived platelets: Paired in vitro characterization using uncontrolled versus controlled freezing rate protocols. Transfusion. 2021;61(2):546-556. PMID: 33345368 https://doi.org/10.1111/trf.16227Карпова О.В., Ройтман Е.В., Игнатова А.А., Мадзаев С.Р., Румянцев С.А., Плясунова С.А., и др. Оценка качества тромбоцитного концентрата, заготовленного методом афереза с использованием добавочного раствора SSP+. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2014;13(2):20–24.Karpova O.V., Roitman E.V., Ignatova A.A., Madzaev S.R., Rumyantsev S.A., Plyasunova S.A., Trakhtman P.E. Evaluation of the quality of platelet concentrates prepared by apheresis method and stored in additive solution SSP+. Voprosy hematologii/onkologii y immunopatplogii v pediatrii. 2014; 13(2): 20–24. (In Russ.).Высочин И.В., Макаров М.С., Кобзева Е.Н., Хватов В.Б. Способ криоконсерирования тромбоцитов. Патент 2623081 Российская Федерация, МПК 51 A01N 1/02 (2006.01). № 2016124196; заявл. 20.06.2016; опубл. 21.06.2017. Бюл. №18.Vysochin I.V., Kobzeva E.N., Makarov M.S., Khvatov V.B. Method of platelet cryopreservation. Patent RU № 2623081. 21.06.2017, Bul. №18.Макаров М.С. Влияние высоких концентраций диметилсульфоксида на биологическую активность тромбоцитов человека в плазме. Медицинский Алфавит. 2016;2(13):48-52.Makarov M.S. Influence of high dimethylsulfoxide concentrations on human platelets’biological activity in plasma. Medical alphabet. 2016;2(13):48-52. (In Russ.).Henderson TR, Henderson RF, York JL. Effects of dimethyl sulfoxide on subunit proteins. Ann N Y Acad Sci. 1975;243:38-53. PMID: 236713 https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.1975.tb25342.xHenderson TR, Henderson RF, York JL. Effects of dimethyl sulfoxide on subunit proteins. Ann N Y Acad Sci. 1975;243:38-53. PMID: 236713 https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.1975.tb25342.x

The authors declare that there are no conflicts of interest present.