Выбор оптимальной среды для разведения пулированных концентратов тромбоцитов, размороженных после криохранения

Актуальность. В настоящее время методика криоконсервирования пулированных концентратов тромбоцитов (ПулКТ) требует оптимизации. Актуальной задачей является подбор адекватного препарата для разведения размороженных доз с целью снижения токсического действия криопротекторов.
Цель работы: оценить влияние плазмозамещающих растворов на морфофункциональные свойства пулированных концентратов тромбоцитов после их криоконсервирования, криохранения и разморозки.
Материалы и методы. В работе исследовали морфофункциональные свойства тромбоцитов ПулКТ, криоконсервированных в присутствии 5–6% диметилсульфоксида и 0,5% декстрана и разведённых после разморозки разными средами. Для ресуспендирования тромбоцитов использовали аутологичную бесклеточную среду, выделенную из ПулКТ до заморозки тромбоцитов, аллогенную свежезамороженную плазму, плазмозамещающий раствор InterSol, препарат-заменитель плазмы – реополиглюкин. Для оценки качества тромбоцитов использовали метод тромбоэластографии и метод оценки морфофункционального статуса тромбоцитов с помощью витального окрашивания флуорохромными красителями.
Результаты. Исходные ПулКТ заметно различались по жизнеспособности и структурно-функциональным особенностям тромбоцитов в их составе. При разведении размороженных ПулКТ аутологичной средой или свежезамороженной плазмой в соотношении 1:9 сохранность общего числа биологически полноценных тромбоцитов составляла в среднем 52–53%, раствором InterSol – 37%, реополиглюкином – 8%. Раствор InterSol вызывал спонтанную активацию тромбоцитов, реополиглюкин – спонтанную активацию, сопряжённую с массовым разрушением тромбоцитов. Выявлена корреляционная взаимосвязь между сохранностью биологически полноценных тромбоцитов после разморозки ПулКТ и морфофункциональными параметрами в исходных ПулКТ. При разведении размороженных ПулКТ аутологичной средой или свежезамороженной плазмой в соотношении 1:9 морфофункциональный статус тромбоцитов не менялся в течение 2–3 часов, при разведении в соотношении 1:4 – в течение 30 мин.
Выводы. В ПулКТ перед криоконсервированием наблюдается снижение ряда морфофункциональных характеристик тромбоцитов на фоне их повышенной реактивности. Ресуспендирование размороженных ПулКТ в чистом растворе InterSol или полиглюкине приводит к быстрой потере качества тромбоцитов и является неэффективным. Для разведения размороженных пулированных концентратов тромбоцитов рекомендуется использовать аутологичную среду с плазмой или аллогенную свежезамороженную плазму.

1. Хамитов Р.Г., Гаврилей А.В., Дрожжина И.Е., Костикова О.Н., Кочеткова М.А., Медянцева Л.Г., и др. Трудности внедрения пулированных тромбоцитов. Тромбоз, гемостаз и реология. 2022;(4):22–29. https://doi.org/10.25555/THR.2022.4.1037

2. Высочин И.В., Кобзева Е.Н., Макаров М.С., Хватов В.Б., Костин А.И., Серых А.В., и др. Клинико-экономическое обоснование оценки индивидуальной совместимости криоконсервированных тромбоцитов и тромбоцитных концентратов перед трансфузией реципиентам. Трансфузиология. 2016;17(3):57-74.

3. Valeri CR, Macgregor H, Ragno G. Correlation between in vitro aggregation and thromboxane A2 production in fresh, liquid-preserved, and cryopreserved human platelets: effect of agonists, pH, and plasma and saline resuspension. Transfusion. 2005;45(4):596-603. PMID: 15819682 https://doi.org/ 10.1111/j.0041-1132.2005.04291.x

4. Буланов А.Ю., Макаров М.С., Боровкова Н.В., Сторожева М.В., Пономарев И.Н., Евсеев А.К., и др. Сравнение параметров качества тромбоцитов в аферезных и пулированных концентратах. Медицинский алфавит. 2024;(20):59–64. https://doi.org/10.33667/2078‑5631‑2024‑20‑59‑64

5. Макаров М.С. Неканонические способы активации тромбоцитов человека. Медицинский алфавит. 2015;3(11):30-35.

6. Tynngård N, Bell A, Gryfelt G, Cvetkovic S, Wikman A, Uhlin M, et al. Cryopreservation of buffy coat derived platelets: Paired in vitro characterization using uncontrolled versus controlled freezing rate protocols. Transfusion. 2021;61(2):546-556. PMID: 33345368 https://doi.org/ 10.1111/trf.16227

7. Карпова О.В., Ройтман Е.В., Игнатова А.А., Мадзаев С.Р., Румянцев С.А., Плясунова С.А., и др. Оценка качества тромбоцитного концентрата, заготовленного методом афереза с использованием добавочного раствора SSP+. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2014;13(2):20–24.

8. Высочин И.В., Макаров М.С., Кобзева Е.Н., Хватов В.Б. Способ криоконсерирования тромбоцитов. Патент 2623081 Российская Федерация, МПК 51 A01N 1/02 (2006.01). № 2016124196; заявл. 20.06.2016; опубл. 21.06.2017. Бюл. №18.

9. Макаров М.С. Влияние высоких концентраций диметилсульфоксида на биологическую активность тромбоцитов человека в плазме. Медицинский Алфавит. 2016;2(13):48-52.

10. Henderson TR, Henderson RF, York JL. Effects of dimethyl sulfoxide on subunit proteins. Ann N Y Acad Sci. 1975;243:38-53. PMID: 236713 https://doi.org/10.1111/j.1749-6632.1975.tb25342.x.